大腸桿菌轉化時免熱激及孵育的方法

中山大學的徐曉鵬博士向大家介紹了一種質粒轉化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法。

背景：目前外源質粒轉化大腸桿菌的步驟，需要先將質粒和感受態細胞在冰上撫育半小時，然后42度熱激90秒，加液體培養基緩搖1個小時左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時間要求嚴格，熱激后大量菌細胞死亡，還要經過液體培養基撫育才能涂板。

方法改進：我們可以在做質粒和感受態細胞在冰上撫育的同時，將要涂的平板放在37度培養箱里，當撫育結束后，立即涂到已經加熱到37度的平板上，利用培養板的熱度代替熱激，平板可以直接放回培養箱倒置培養。由于溫度相對溫和，細胞死亡的少，之后的液體培養基撫育過程也省掉了。

這個方法我們一直在用，質粒可以成功轉進菌體中，只要感受態細胞沒有問題，其轉化率和使用熱激法差不多，而且若是新鮮制備的感受態細胞，轉化率甚更高。可以省下42度水浴裝置的儀器，還節省了少1個小時的時間。