大腸桿菌轉(zhuǎn)化時免熱激及孵育的方法

中山大學的徐曉鵬博士向大家介紹了一種質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌時免熱激及孵育的方法。

背景：目前外源質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌的步驟，需要先將質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育半小時，然后42度熱激90秒，加液體培養(yǎng)基緩搖1個小時左右再離心涂板。其中熱激步驟溫度和時間要求嚴格，熱激后大量菌細胞死亡，還要經(jīng)過液體培養(yǎng)基撫育才能涂板。

方法改進：我們可以在做質(zhì)粒和感受態(tài)細胞在冰上撫育的同時，將要涂的平板放在37度培養(yǎng)箱里，當撫育結(jié)束后，立即涂到已經(jīng)加熱到37度的平板上，利用培養(yǎng)板的熱度代替熱激，平板可以直接放回培養(yǎng)箱倒置培養(yǎng)。由于溫度相對溫和，細胞死亡的少，之后的液體培養(yǎng)基撫育過程也省掉了。

這個方法我們一直在用，質(zhì)粒可以成功轉(zhuǎn)進菌體中，只要感受態(tài)細胞沒有問題，其轉(zhuǎn)化率和使用熱激法差不多，而且若是新鮮制備的感受態(tài)細胞，轉(zhuǎn)化率甚更高。可以省下42度水浴裝置的儀器，還節(jié)省了少1個小時的時間。