ELISA各環節中常見問題及解決方法

上海科興生物主要從事小鼠elisa試劑盒,放免法試劑盒,動物血清,培養基價格,植物elisa試劑盒 細菌培養基 金標試劑盒 抗生素標準品，主要產品有：ELISA試劑盒、PCR試劑盒、金標試劑盒、細胞、血清、抗體、生物試劑、耗材、培養基、對照品、標準品等。

ELISA試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。

上海科興生物將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結于下，以期給同行帶來一些啟發，提高試驗質量。

下面分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因，并給出相應的解決辦法一、選擇試劑

選擇質量優良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。

二、加樣

可能原因：

1)血清或血漿標本分離不好即進行加樣; 2)手工操作中，加樣板過多造成加樣后放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); 3)加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

解決辦法：

1) 標本為血清：好將血液先自然存放1-2小時后，再用3000rmp離心15分鐘;標本為血漿：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管，采血后必須立即顛倒采血管混合5-10次，放置一段時間后，3000rpm離心15分鐘;若在幾天內檢測，可放在2-8℃冰箱中，若要貯存，則置于-20℃的低溫冰箱內。 2) 加樣后及時放入孵箱。 3) 加酶試劑后用吸水紙在酶標板表面輕拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自動加樣，好選擇FAME或其他后處理儀器加酶試劑。 5) 標本較多時，請分批操作。

三、 孵育

可能原因：

1) 孵育時未貼封片或加蓋，使標本或稀釋液蒸發，吸附于孔壁，難于清洗*; 2) 孵育時間人為延長，導致非特異性結合緊附于反應孔周圍，難以清洗*。

解決辦法：

1) 貼封片或加蓋; 2) 按說明步驟嚴格控制操作時間。

四、洗板

可能原因：

1) 采用手工洗板，孔與孔之間液體交叉。 2) 采用半自動洗板機洗板時，洗液量不足，導致洗板不*;洗板針堵塞，抽吸不*;洗板不暢，導致洗板效果差。 3) 反應板過多造成洗板等待時間長。

解決辦法：

1) 保證洗液注滿各孔，洗板針暢通，洗完板后好在吸水紙(選擇干凈、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍干; 2) 合理安排，或多用幾臺洗板機。

五、顯色

可能原因：

1) 顯色劑配制后放置時間過長或使用過期顯色劑; 2) 加顯色劑時濺出孔外造成液體回流。

解決辦法： 1) 顯色劑盡量在臨用前配制，堅持不用過期顯色劑，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; 2) 加樣時保持顯色劑不外流; 3) A、B液應避免接觸金屬器械。

六、終止

可能原因如加終止液時產生較多氣泡，導致假陽性增加。所以在加終止液時應避免產生氣泡。

七、讀板

如讀板時板底不清潔等。應保證酶標板清潔。所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸; 盡可能實現ELISA檢測標準自動化，有效提高檢測質量。

在實際操作中，除了選擇優良試劑外，必須嚴格按照操作步驟進行操作，同時作好室內質控、室間質評，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本，才能保證檢測質量。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀，這對于實現ELISA標準化檢測、提高檢測質量起到了重要作用。

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