磷酸化的 和 非磷酸化的 抗體 有什么區(qū)別？

磷酸化的 和 非磷酸化的 抗體 有什么區(qū)別？

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后者是測(cè)該蛋白的含量，不能知道其活性狀態(tài)，前者是測(cè)該蛋白的磷酸化水平如何，側(cè)重于了解該蛋白的一種活性狀態(tài)。很多信號(hào)通路的蛋白在受到某些刺激后都是通過(guò)改變其磷酸化水平的改變而引起細(xì)胞的一系列反應(yīng)，其蛋白含量并不見(jiàn)得會(huì)有多大的變化。 

先要說(shuō)明的就是檢測(cè)的蛋白質(zhì)在你檢測(cè)的組織或者細(xì)胞中是表達(dá)的,根據(jù)該蛋白質(zhì)的功能狀態(tài)(磷酸化還是非磷酸化)的需要,調(diào)控該蛋白質(zhì)活性的酶(即蛋白磷酸酶(去磷酸化)或蛋白激酶(磷酸化))對(duì)其進(jìn)行調(diào)空,因此當(dāng)細(xì)胞受到刺激時(shí),通過(guò)信號(hào)級(jí)聯(lián)通路可能會(huì)增強(qiáng)目的蛋白的磷酸化水平或者磷酸化水平減弱,所以: 

1.磷酸化抗體主要是針對(duì)磷酸化位點(diǎn)制備的,檢測(cè)該蛋白在細(xì)胞受到刺激時(shí)該蛋白的變化情況(磷酸化水平增強(qiáng)還是減弱); 

2.非磷酸化抗體(主要針對(duì)非磷酸化位點(diǎn)的肽段制備的)主要檢測(cè)組織或細(xì)胞中該蛋白的表達(dá)情況,組織分布或細(xì)胞中定位,同時(shí)可以作為磷酸化水平變化的內(nèi)參等.

區(qū)別在于： 

1.磷酸化抗體的檢測(cè)的是出于活性狀態(tài)（磷酸化）的蛋白 

2.磷酸化抗體只針對(duì)磷酸化位點(diǎn)設(shè)計(jì)，是一種位點(diǎn)特異性的多抗，這到有些單抗的特性。 3.普通抗體的合成（多抗）：原核表達(dá)蛋白->純化->免疫動(dòng)物->收獲抗體 

4.磷酸化抗體合成：人工合成含磷酸化位點(diǎn)的多肽->人工體外磷酸化->鏈接半抗原->免疫動(dòng)物->收獲抗體 

5.磷酸化的蛋白很大部分是轉(zhuǎn)錄相關(guān)因子。因此使用磷酸化抗體和普通抗體 

檢測(cè)同一個(gè)蛋白，原位檢測(cè)可能具有不同的細(xì)胞定位。轉(zhuǎn)錄因子磷酸化后由細(xì)胞質(zhì)進(jìn)入細(xì)胞核。

 6.一般而言，磷酸化蛋白的實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分子功能更直接相關(guān)。  

7.也就是說(shuō)，能使用磷酸化的更好。很多時(shí)候是同時(shí)使用 

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