分光光度計(jì)是生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室*的好伙伴。它常用來測定生物樣品中的核酸、蛋白和細(xì)胞。這些樣品要么體積有限，要么濃度很高，為分光光度法測定帶來了一定挑戰(zhàn)。當(dāng)然，技術(shù)在不斷發(fā)展，讓微量樣品的測定成為現(xiàn)實(shí)。在分光光度計(jì)的使用過程中，有哪些需要注意的呢？讓專家來告訴你。
據(jù)介紹，分光光度計(jì)使用過程中的大問題往往在于用戶選擇了錯誤的方法或錯誤的比色皿。而另一個問題在于純化的策略不對。用戶應(yīng)正確選擇分光光度計(jì)，并注意下面的一些問題。
低體積 vs. 低濃度
我們先要了解樣品的特性。有時，我們可能會混淆低體積和低濃度，產(chǎn)生有問題的數(shù)據(jù)。這時，我們有必要回憶一下比爾-朗伯定律：當(dāng)一束平行單色光垂直通過某一均勻非散射的吸光物質(zhì)時，其吸光度A與吸光物質(zhì)的濃度c及吸收介質(zhì)的厚度l成正比。根據(jù)這一定律，當(dāng)吸收介質(zhì)厚度不變時，A與c之間應(yīng)該成正比。而對于高濃度的樣品，應(yīng)使用較短的光程長度進(jìn)行測定。
樣品純度
樣品純度很重要，這不僅僅關(guān)乎分光光度法測定，也涉及到其他的下游應(yīng)用。樣品中的雜質(zhì)可能包括蛋白、緩沖液組分，甚細(xì)胞。你應(yīng)當(dāng)根據(jù)樣品量和濃度來選擇樣品制備策略。各大廠家都提供選擇指南和操作手冊，教你如何選擇適合的產(chǎn)品。此外，要避免過濾柱的過載，以免產(chǎn)生不純的樣品洗脫液。
選擇適當(dāng)?shù)谋壬?/span>
比色皿是光學(xué)透明的容器，裝有分析溶液，將樣品引入光路中。分析波長在350 nm以上時，可選用玻璃或石英比色皿，在350 nm以下時須使用石英比色皿，當(dāng)然，現(xiàn)在也有一次性的塑料比色皿。有些比色皿提供不同的光程長度，如Eppendorf的UVettes。它提供兩種不同的透光光徑：10 mm和2 mm。通常濃度的樣品可以用10 mm光程長度進(jìn)行檢測。對于高濃度的樣品，只需將比色皿旋轉(zhuǎn)90°，使用稍短的2 mm光徑進(jìn)行檢測。
在使用前一定要仔細(xì)檢查比色皿，如果有刮花或油污，或者上面有指紋，都會導(dǎo)致不準(zhǔn)確的測定結(jié)果。目前市場上的有些分光光度計(jì)很靈活，可以容納多種比色皿，包括微量比色皿。這些微量比色皿使用微量的高濃度樣品，特別適合生物分子（如核酸和蛋白）的測定。有些分光光度計(jì)是直接把樣品放在測量窗口上，也十分方便。
軟件要求
沒人想把時間花在儀器培訓(xùn)上。因此，在您選擇分光光度計(jì)時，簡單易用也是個重要的考量因素。即拆即用，這當(dāng)然是美了。數(shù)據(jù)管理和存儲也應(yīng)當(dāng)考慮。在有些情況下，電源中斷或系統(tǒng)故障會導(dǎo)致數(shù)據(jù)損失。如今有些儀器能直接連到電腦，而不需要額外的軟件或存儲設(shè)備。
隨著技術(shù)的發(fā)展，專為生物學(xué)應(yīng)用而開發(fā)的分光光度計(jì)在不斷涌現(xiàn)。相信我們的選擇會越來越多，而儀器使用也會越來越簡單、方便、靈活。
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