了解磷酸化蛋白提取操作方法

磷酸化蛋白提取試劑盒用于哺乳動物組織和細胞中提取總蛋白，試劑盒中的裂解液含有蛋白酶抑制劑和磷酸酶抑制劑，作用較為強烈，可快速獲得總蛋白，可用于免疫印跡實驗等基礎研究實驗，由于含有上述的酶抑制劑，不能用于研究蛋白激酶和磷酸激酶的研究。本品僅用于科研。

產品組成:

操作方法:
1、組織總蛋白的提取
在1ml的冷裂解液中各加入10ul的磷酸酶抑制劑、蛋白酶抑制劑和PMSF；混勻，放置在冰上備用；
稱取0.1g的新鮮組織，放置于玻璃勻漿器的入口緩沖處，用眼科剪將組織塊盡可能的剪碎，然后加入0.5-1ml的新配置的裂解液，研磨直至沒有明顯的組織塊，這個過程注意冰上操作；
將組織勻漿液移入1.5ml的EP管中，4 oC 12000g離心30min；
吸取上清至新的管中；
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。)
2、細胞總蛋白的提取
裂解液的用量：107個細胞需要裂解液1ml；
貼壁細胞：棄去培養基，用冷的PBS洗兩次，棄去PBS，然后加入計算好的細胞裂解液；在冰上用細胞刮刀進行刮離細胞，
將刮離的細胞裂解液移入EP管中，顛倒裂解20-30min
懸浮細胞：4 oC 400g離心收集細胞，用冷的PBS洗兩次細胞，同樣按細胞數加入裂解液，
渦旋10s，放置冰上裂解10min，重復3-4次；
裂解完畢之后，將細胞裂解液4 oC 12000g離心30min；
將上清移入新的EP管中；
進行蛋白定量或者變性進行蛋白實驗。
（提取好的蛋白建議保存于-80 oC，即用即取，避免反復凍融，避免長時間儲存。)

注意事項：
實驗過程，所有試劑都要需要預冷或者即融，保證操作過程中的低溫環境；
PSMF（有毒）現用現加，因為PMSF在水溶液中會快速降解；