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          葡萄糖代謝及其含量檢測的常用方法

          發布日期: 2024-04-10
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          常用方法

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          葡萄糖(Glucose)是自然界中分布泛的己醛糖。根據其分子中碳原子數目分類,葡萄糖屬于己糖,根據官能團分類,葡萄糖屬于五羥基己醛,具有多元醇和醛的化學特性。葡萄糖是生物體新陳代謝重要的營養物質,也是維持正常生命活動的最主要的能量來源之一。




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          ①葡萄糖的

          成代謝

          葡萄糖的合成代謝是指綠色植物及光能細菌的光合作用合成葡萄糖的過程。對于動物來講,是指利用非糖物質合成葡萄糖的過程。




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          PART 1/光合作用




                光合作用是綠色植物及光能細菌利用光能,同化二氧化碳和水制造有機物并釋放氧氣的過程。光合作用過程根據是否需光分為光反應階段和暗反應階段。在光反應階段,植物吸收光能形成同化力,即NADPH和ATP,將光能轉換為活躍的化學能,由于這些反應是在葉綠體中的類囊體上進行的,也稱為類囊體反應。在暗反應階段,植物利用光反應階段產生的同化力,通過一系列酶促反應,催化二氧化碳還原為穩定的葡萄糖。




               光合作用將光能轉換為可用于生命過程的化學能,不僅是植物合成其自身結構物質和維持其生命活動能量物質的根本來源,同時也是其他生命有機體的結構和能量物質的根本來源。




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          PART 2/糖異生作用




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          糖異生指細胞內非糖物質如乳酸、丙酮酸、生糖氨基酸、甘油、三羧酸循環中間產物等合成葡萄糖的過程。該過程主要在動物肝臟的細胞質和線粒體中進行,是動物細胞自身合成葡萄糖的途徑。




          機體的糖異生作用主要發生在饑餓、劇烈運動或進食高蛋白食物后。糖異生作用可保證饑餓情況下,血糖濃度相對恒定;在激烈運動肌肉產生大量乳酸后,糖異生將其轉化為葡萄糖,更新肌糖原,防止乳酸酸中毒的發生;高蛋白食物消化后的氨基酸經過分解代謝產生α-酮酸,可通過糖異生合成葡萄糖。








          ②葡萄糖

          的分解代謝


          葡萄糖的分解代謝主要包括無氧代謝途徑、有氧代謝途徑和磷酸戊糖途徑,根據細胞內供氧水平及生理狀態的不同而進入不同的代謝途徑進行分解轉化,為機體生命活動提供能量和合成原料。


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          PART 1/無氧代謝途徑




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          葡萄糖在組織細胞中經過一系列酶促反應分解生成丙酮酸,當缺氧或供氧不足時,丙酮酸在細胞質中進一步被還原成乳酸,該過程稱為葡萄糖的無氧代謝,也稱為乳酸發酵。

          葡萄糖經過無氧代謝產生的能量雖少,但保證了機體在缺氧情況下仍能進行生命活動。無氧代謝的中間產物也可以作為其他物質合成的原料。




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          PART 2/有氧代謝途徑




          葡萄糖的有氧代謝是指氧氣供應充足時,葡萄糖在細胞質中分解產生的丙酮酸進入線粒體,氧化分解成二氧化碳和水,并產生大量能量供生命活動需要的過程。有氧代謝是生物體獲得能量的主要方式,該過程產生的能量約為無氧代謝產生能量的15-16倍。





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          葡萄糖有氧代謝的過程是在細胞質基質和線粒體兩個部位進行的。整個代謝過程分為三個階段:第一個階段是葡萄糖在細胞質基質中分解成丙酮酸,第二個階段是丙酮酸在線粒體內膜上氧化脫羧生成乙酰輔酶A,第三個階段是乙酰輔酶A經過三羧酸循環氧化分解為水和二氧化碳。其中三羧酸循環不僅是糖類氧化分解產生ATP的主要途徑,也是脂類、氨基酸等最終分解產生能量的共同途徑。整個有氧氧化過程伴隨著多種中間產物的生成,為其他物質的代謝提供多種化合物的碳骨架。




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          PART 3/磷酸戊糖途徑




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          磷酸戊糖途徑是葡萄糖在細胞質基質中磷酸化生成6-磷酸葡萄糖,經過氧化脫羧等一系列反應生成5-磷酸核酸(磷酸戊糖)和NADPH的過程,也稱己糖磷酸支路或戊糖磷酸循環。




          磷酸戊糖途徑是生物體內利用葡萄糖生成5-磷酸核糖的代謝途徑,而核苷酸和核酸合成所需的核糖或脫氧核糖均需以5-磷酸核糖作為原料。該途徑是機體內糖類代謝與核苷酸及核酸代謝的交匯途徑,還是生成NADPH的主要途徑。





          ③葡萄糖含量

          常用檢測方法

          目前,實驗室檢測葡萄糖含量的方法主要有葡萄糖氧化酶(GOD-POD)法、己糖激酶(HK)法、鄰甲苯胺法以及高效液相色譜(HPLC)法等。




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          PART 1/葡萄糖氧化酶

          (GOD-POD)法




          葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫,過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-氨基安替比林偶聯酚,生成有色醌類化合物。該產物的生成量與葡萄糖含量成正比,據此可計算得到樣本中的葡萄糖含量。

          GOD-POD法操作簡便,準確度和精密度較高,是實驗室檢測生物組織葡萄糖含量和血糖含量的常用方法。




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          PART 2/己糖激酶(HK)法




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          己糖激酶催化葡萄糖和ATP發生磷酸化反應,生成葡萄糖-6-磷酸和ADP,后者在葡萄糖-6-磷酸脫氫酶的作用下催化NADP+還原得到NADPH。根據NADPH的生成速率,可計算得到葡萄糖含量。




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          PART 3/鄰甲苯胺法




          葡萄糖與鄰甲苯胺試劑在強酸條件下發生縮合反應,葡萄糖的醛基與鄰甲苯胺縮合成葡萄糖基胺,后者脫水生成席夫(Schiff)堿,呈現藍綠色,在630nm處有特征吸收峰,通過其吸光值可計算得到葡萄糖含量。


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          溫馨提示

          索萊寶生化試劑盒貨號以“0"、“5"結尾,分別代表兩類反應體系。以“0"結尾的代表試劑盒所用方法為分光光度法(反應體系約1mL),可以用分光光度計進行檢測;以“5"結尾的試劑盒代表所用方法為微量法(反應體系約0.2mL),可以用分光光度計或者酶標儀進行檢測。




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