bca法測蛋白濃度步驟

bca法是常用蛋白濃度測定方法之一。其他蛋白濃度測定方法還有考馬斯亮藍(lán)法、bradford法測蛋白濃度等。本文是用bca法測定蛋白濃度。是使用索萊寶BCA蛋白濃度測定試劑盒完成本實(shí)驗(yàn)。

下面是bca法測蛋白濃度步驟：

1. 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：取一塊酶標(biāo)板，按照下表加入試劑 ；

2. 根據(jù)樣品數(shù)量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻；    

3. 各孔加入200μL BCA工作液；    

4. 把酶標(biāo)板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘，然后在562nm下比色測定。以蛋白含量（μg）為橫坐標(biāo)，吸光值為縱坐標(biāo)，繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線；   

5. 稀釋待測樣品至合適濃度，使樣品稀釋液總體積為20μL，加入BCA工作液200μL，充分混勻，37℃放置30分鐘后，以標(biāo)準(zhǔn)曲線0號(hào)管做參比，在 562nm波長下比色，記錄吸光值；     

6. 根據(jù)所測樣品的吸光值，在標(biāo)準(zhǔn)曲線上即可查得相應(yīng)的蛋白含量（μg），除以樣品稀釋液總體積（20μL），乘以樣品稀釋倍數(shù)即為樣品實(shí)際濃度（單 位：μg/μL）。

【bca法優(yōu)缺點(diǎn)】 

(一) 操作簡單，快速，45分鐘內(nèi)完成測定，比經(jīng)典的Lowary法快4倍且更加方便； 

(二) 準(zhǔn)確靈敏，試劑穩(wěn)定性好，BCA試劑的蛋白質(zhì)測定范圍是20-200μg/ml，微量BCA測定范圍在0.5-10μg/ml。 

(三) 經(jīng)濟(jì)實(shí)用，除 試管 外，測定可在微板孔中就進(jìn)行，大大節(jié)約樣品和試劑用量； 

(四) 抗試劑干擾能力比較強(qiáng)，如去垢劑，尿素等均無影響