bca法測蛋白濃度步驟

bca法是常用蛋白濃度測定方法之一。其他蛋白濃度測定方法還有考馬斯亮藍法、bradford法測蛋白濃度等。本文是用bca法測定蛋白濃度。是使用索萊寶BCA蛋白濃度測定試劑盒完成本實驗。

下面是bca法測蛋白濃度步驟：

1. 標準曲線的繪制：取一塊酶標板，按照下表加入試劑 ；

2. 根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B（50:1）配制適量BCA工作液，充分混勻；    

3. 各孔加入200μL BCA工作液；    

4. 把酶標板放在振蕩器上振蕩30sec，37℃放置30分鐘，然后在562nm下比色測定。以蛋白含量（μg）為橫坐標，吸光值為縱坐標，繪出標準曲線；   

5. 稀釋待測樣品至合適濃度，使樣品稀釋液總體積為20μL，加入BCA工作液200μL，充分混勻，37℃放置30分鐘后，以標準曲線0號管做參比，在 562nm波長下比色，記錄吸光值；     

6. 根據所測樣品的吸光值，在標準曲線上即可查得相應的蛋白含量（μg），除以樣品稀釋液總體積（20μL），乘以樣品稀釋倍數即為樣品實際濃度（單 位：μg/μL）。

【bca法優缺點】 

(一) 操作簡單，快速，45分鐘內完成測定，比經典的Lowary法快4倍且更加方便； 

(二) 準確靈敏，試劑穩定性好，BCA試劑的蛋白質測定范圍是20-200μg/ml，微量BCA測定范圍在0.5-10μg/ml。 

(三) 經濟實用，除 試管 外，測定可在微板孔中就進行，大大節約樣品和試劑用量； 

(四) 抗試劑干擾能力比較強，如去垢劑，尿素等均無影響