關(guān)于核酸變性預制膠的操作步驟，你了解多少？

發(fā)布日期： 2021-05-13

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　　核酸變性預制膠在分離片段DNA分子時效果很好，分辨率很高，甚至相差1bp的DNA的片段都能分開，一個標準點樣孔中可以容納相對大量的DNA。所以常被用于蛋白印跡實驗、遺傳圖譜構(gòu)建、數(shù)量形狀基因定位、標記輔助選擇等生物多樣性研究等。

　　核酸變性預制膠的操作步驟：

　　一、非變性預制膠：

　　1、準備樣品：將樣品和loadingbuffer（5×）按照4：1混合均勻。

　　2、準備1×runningbuffer：取200ml的5×TBEbuffer，加入去離子水至1L，制備成1×TBEbuffer。

　　3、將預制膠裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。

　　4、上樣：在梳孔內(nèi)加入適當濃度和體積的DNA樣品。

　　5、電泳條件：150V,50~75min（電泳時間取決于凝膠濃度）

　　6、電泳結(jié)束，取出凝膠。

　　二、尿素變性預制膠：

　　1、準備樣品：將樣品和UREA-TBEloadingbuffer（5×）按照4：1混合均勻,100℃下加熱3-5min。

　　2、準備1×runningbuffer：取200ml的5×TBEbuffer，加入去離子水至1L，制備成1×TBEbuffer。

　　3、將核酸變性預制膠裝入兼容的電泳槽中，加入電泳緩沖液，再緩慢地將梳子拔出。

　　4、上樣：用1×TBEbuffer反復沖洗梳孔以清除梳孔內(nèi)的尿素，在梳孔內(nèi)加入適當濃度和體積的DNA樣品。

　　5、電泳條件：150V,50~75min（電泳時間取決于凝膠濃度）

　　6、電泳結(jié)束，取出凝膠。

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