教你成為平淡無奇的WB實驗小能手—樣本制備篇

接下來，讓小編帶您總結關于蛋白定量和蛋白變性相關的知識點：

1. BCA法的測定原理是蛋白質將銅離子還原成亞銅離子，后者在堿性溶液中與BCA結合生成紫紅色結合物，該復合物在562nm處有吸光值且與蛋白質濃度成正相關性，據此可測定蛋白質濃度。考馬斯亮藍在游離狀態下呈紅色，大光吸收在488nm；當它與蛋白質結合后變為青色，蛋白質—色素結合物在595nm波長下有大光吸收。其光吸收值與蛋白質含量成正比，因此可用于蛋白質的定量測定。

2. Lowry法又稱為Folin-酚試劑法，首先在堿性溶液中形成銅-蛋白復合物，然后這一復合物還原磷鉬酸-磷鎢酸試劑（Folin-酚上級），產生鉬藍和鎢藍復合物的深藍色，這種深藍色的復合物在745~750nm處有大的吸收峰，顏色的深淺（吸收值）與蛋白質濃度成正比，可根據750nm的光吸收值大小計算蛋白質的含量。

3. Bradford法又稱為考染法。染料結合法測定蛋白質的優點是靈敏度較高，可檢測到微量蛋白，操作簡便，試劑配制極簡單，重復性好，但干擾因素多。考馬氏亮藍G-250具有紅色和青色兩種色調、在酸性溶液中游離狀度下為棕紅色，當它通過疏水作用與蛋白質結合后，變成藍色，大吸收波長從465nm轉移到595nm處，在一定的范圍內，蛋白質含量與595nm的吸光度成正比，測定595nm處光密度值的增加即可進行蛋白質的定量。