25格×16格的血球計數板使用方法介紹

25格×16格的血球計數板使用方法介紹

血球計數板介紹用厚玻璃制成。每塊計數板由H形凹槽分為2個同樣的計數池。計數池兩側各有一支持柱，將特制的蓋玻片覆蓋其上，形成高0.10mm的計數池。計數池畫有長、寬各3.0mm的方格，分為9個大方格，每個大格面積為1.0mm。容積為0.1mm3（ul），其中，中央大方格用雙線分成25個中方格，位于正中及四角5個中方格是紅細胞計數區域，用單線劃分為16個小方格。

四角的4個大方格是白細胞計數區域，用單線劃分為16個中方格。根椐標準局（NBS）規定，大方格每邊長度允許誤差為±1%。

使用方法：

1.視待測菌懸液濃度，加無菌水適當稀釋（斜面一般稀釋100倍），以每小格的菌數可數為度。

2.取潔凈的血球計數板一塊，在計數區上蓋上一塊蓋玻片。

3.將菌懸液搖勻，用滴管吸取少許，從計數板中間平臺兩側的溝槽內沿蓋玻片的下邊緣摘入一小滴（不宜過多），讓菌懸液利用液體的表面張力充滿計數區，勿使氣泡產生，并用吸水紙吸去溝槽中流出的多余菌懸液。也可以將菌懸液直接滴加在計數區上（不要使計數區兩邊平臺沾上菌懸液，以免加蓋蓋玻片后，造成計數區深度的升高），然后加蓋蓋玻片（勿使產生氣泡）。

4.靜置片刻，使細胞沉降到計數板上，不再隨液體漂移。將血球計數板放置于顯微鏡的載物臺上夾穩，先在低倍鏡下找到計數區后，再轉換高倍鏡觀察并計數。由于細胞的折光率和水的折光率相近，觀察時應減弱光照的強度。

5.25個大方格組成的計數區，除數上述四個大方格外，還需數中央1個大方格的菌數（即80個小格）。為了保證計數的準確性，避免重復計數和漏記，在計數時，對沉降在格線上的細胞的統計應有統一的規定。如菌體位于大方格的雙線上，計數時則數上線不數下線，數左線不數右線，以減少誤差。即位于本格上線和左線上的細胞計入本格，本格的下線和右線上的細胞按規定計入相應的格中。

6.對于出芽的酵母菌，芽體達到母細胞大小一半時，即可作為兩個菌體計算。每個樣品重復計數2-3次（每次數值不應相差過大，否則應重新操作），按公式計算出每mL（g）菌懸液所含細胞數量。

7.測數完畢，取下蓋玻片，用水將血球計數板沖洗干凈，切勿用硬物洗刷或抹擦，以免損壞網格刻度。洗凈后自行晾干或用吹風機吹干，放入盒內保存。

25格×16格的血球計數板計算公式：

細胞數/ml=80小格內細胞個數/80×400×10000×稀釋倍數