胎牛血清使用中的常見問題及解決方法

胎牛血清使用中的常見問題

1、 如何儲存和解凍血清才不會使產品質量受損?

將血清從冷凍箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室溫下使之全融。但必須注意的是，融解過程中必須規則地搖晃均勻。

長時間儲存在2-8℃時，血清中的各種蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纖維蛋白原、玻粘連蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可見的混濁。因此，推薦在-20℃以下儲存血清，并避免反復凍融。

我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時，請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶，建議無菌分裝血清恰當的滅菌容器內，再放回冷凍。

2、血清中包含絮狀沉淀，它們是什么，怎么處理?

沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性，不會影響產品性質。要除去沉淀，離心血清(400g，1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部，將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀，因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱37℃就會再溶解。所以，使用產品時要搖動并加熱血清37℃，沉淀會自然消失。

3、實驗室如何選擇適合的血清?

國內一致認為HYCLONE的血清是比較好的，但是根據我在北美的經歷，國外一般認為GIBCO比HYCLONE好，所以并不是價格決定質量，但是總的來說這兩種價格普遍偏貴，一般不是太嬌氣的細胞，國產的就夠用了。此外，由于國內HYCLONE，GIBCO并沒有生產線，我們只能從代理商那里買，而代理商又魚龍混雜，所以買到假貨的可能性也很大。所以，我一般會從直銷員那里買血清，有的國外生物公司由于剛剛進入中國，度不高，但是其實在國外已經做得很不錯了，如Wisent等，他們在國內有辦事處，我會從那里拿，血清的品質和HYCLONE不相上下，但價格相對優惠很多。

4、 如何避免血清中產生沉淀?

按如下操作可避免沉淀的產生：

(1)解凍血清時，請隨時將之搖晃均勻，使溫度及成分均一，減少沉淀的發生。

(2) 血清分裝凍存時，須規則搖晃均勻(小心勿造成氣泡)，使溫度與成分均一。

(3) 勿直接由-20℃直接37℃解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質凝結而發生沉淀。

(4) 勿將血清置于37℃太久，否則血清會變得渾濁，同時血清中許多較不穩定的成份也會因此受到破壞，從而影響血清的品質。

(5) 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以無須做此步驟。

(6) 若必須做血清的熱滅活，請遵守56℃，30分鐘的原則，并且隨時搖晃均勻。溫度過高，時間過久或搖晃不均勻，都會造成沉淀物的增多。

5、 培養基中添加了血清和抗生素后，可長期保存嗎?

一旦您在新鮮培養基中添加了血清和抗生素時，您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。

6、 為什么要熱滅活血清?

加熱可以滅活補體系統。激活的補體參與溶解細胞事件，刺激平滑肌收縮，細胞和血小板釋放組胺，激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學 研究，培養ES細胞、平滑肌細胞時，推薦使用熱滅活血清。

7、 有必要做熱滅活嗎?

實驗顯示，經過正確處理的熱滅活血清，對大多數的細胞而言是不需要的。經此處理過的血清對細胞的生長只有微小的促進，或*沒有任何作用，甚通常因為高溫處理影響了血清的質量，而造成細胞生長速率的降低。而經過熱處理的血清，沉淀物的形成會顯著的增多，這些沉淀物在倒置顯微鏡下觀察，像是“小黑點”，常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染，而把血清放在37℃環境中，又會使此沉淀物更增多，使研究者誤認為是微生物 的分裂擴增。

若非必須，可以不需要做熱處理這一步。不但節省時間，更確保血清的質量!

8、細胞培養 中出現黑點是污染嗎?如何處理?

一旦您在細胞培養的過程中發現有黑點生成，先，要肉眼觀察培養基是否混濁，然后，在鏡下觀察培養細胞生長的狀態，黑點是否游動。如果細胞被污染，微生物則會大量繁殖，培養基就會迅速變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。

如果在鏡下觀察細胞，生長狀態良好，與黑點出現前相比，沒有任何變化，那么，黑點的出現可能與以下幾種情況有關：

(1)細胞生長過老，破碎的細胞殘骸;

(2)血清質量不好，反復凍融的結果;

(3)配制培養基的pH值偏高，不宜細胞生長;

(4)配制培養基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;

(5)培養原代細胞中出現小黑點，可能是原代組織中的雜質，多次傳代可以消除。

9、 細胞培養中如何防止黑點生成?

(1) 盡可能地減少血清凍融次數。

(2) 培養基無需37℃水浴。

(3) 培養基保持合適PH值7.0- 7.2。

(4) 嚴格控制配制培養基的水質，容器定期刷洗。

(5) 掌握細胞傳代的良好時機，細胞切勿生長過老。

10、小牛血清和胎牛血清有何區別與注意事項?

來源不同：胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰懷孕母牛的時候,通過心臟穿刺采血獲取的胎牛的血清，新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生1014 天的小牛。

組份與比例不同：兩者所含的促細胞生長因子、促貼附因子、激素及其他活性物質等組份與比例不同，用途與用法不同：某些細胞必需胎牛血清才能生長，而有些細胞只需小牛血清即可，使用濃度不同，一般在5%-10%，有特殊要求的濃度在20%。

血清保存和使用須注意：血清應保存在-5℃-20℃，若存放在4℃不可超過一個月。解凍血清時 ，應先將血清于2-8℃冰箱，并經常搖勻使之溶解，然后室溫放置使之升溫，不可將冷凍的血清直接放入37℃水浴或者溫箱中，如放在37℃解凍，顏色加深，粘稠度也會增加，血清在解凍和熱滅活后，應按用量分裝并于-20℃保存，避免反復凍融。