DH5α感受態細胞

DH5α感受態細胞  

品牌：Solarbio | 貨號：C1100

本公司生產的DH5α感受態細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學轉化。使用pUC19質粒檢測，轉化效率可達108，-70℃保存3-5個月轉化效率不發生改變。

基因型: supE44△lacU169（φ80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特   點: 一種用于鋪制與培養質粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的產物可與pUC載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現β互補，可用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1、將感受態細胞置于冰上融化，以下實驗以100ul感受態細胞為例。

2、向感受態細胞懸液中加入需轉化的目的DNA，注意目的DNA的體積不要超過感受態細胞懸          液體積的十分之一，輕輕旋轉離心管以混勻內容物，冰浴放置30分鐘。

3、將離心管置于42℃水浴中60-90秒，然后快速轉移到冰浴中放置2-3分鐘，注意不要搖動離       心管。

4、向離心管中加入500ul無菌無抗的SOC或LB培養基，37℃ 180rpm振蕩培養1小時。目的是        使質粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5、取適量已轉化的感受態細胞涂布含相應抗生素的SOC或LB平板，37℃倒置培養12-16小            時。涂布用量可根據具體實驗來調整，如轉化的DNA總量較多，可取100ul左右的轉化產物        涂板；反之，如轉化的DNA總量較少，可取200-300ul的轉化產物涂板。過多菌液可以抑          制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布        于一個平板中。涂布剩余的菌液可4℃保存，如果次日的轉化菌落數過少，可以將剩下的          菌液再涂布新的平板。

注意事項：

      1、感受態細胞應保存在-70℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

      2、實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它DNA或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

      3、轉化時，轉化效率與外源DNA的濃度在一定范圍內成正比，但當加入的外源DNA量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時DNA體積要小于感受態細胞體積的十分之一。

     4、轉化率的計算：轉化率＝產生菌落的總數/鋪板DNA總量。

     5、為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產物，以重新轉化，將損失降到低。