Bradford法蛋白濃度測定試劑盒  

品牌：Solarbio | 貨號：PC0010

bradford蛋白定量試劑盒產品內容：

產品簡介：

考馬斯亮蘭G-250染料，在酸性溶液中與蛋白質結合，使染料的大吸收峰的位置（Imax），由465nm變為595nm，在一定的濃度范圍內，測定的吸光度值A595與蛋白質濃度成正比。Bradford法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，樣品中巰基乙醇的濃度可高達1M，二硫蘇糖醇的濃度可高達5mM，但受略高濃度的去垢劑影響，需確保SDS的濃度低于0.1%，Triton X-100低于0.1%，Tween 20, 60, 80低于0.06%。含去垢劑的樣品推薦使用索萊寶生產的BCA蛋白濃度測定試劑盒。

操作說明：

一．微孔酶標儀法 

1. *溶解蛋白標準品，取10ul，稀釋250ul ，使終濃度為0.2mg/ml。待測蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。 

2. 5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取1ml 5×G250染色液，加入4ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。 

3. 將標準品按0,2,4,6,8,12,16,20微升分別加到96孔板中，加PBS稀釋液補足到20微升。 

4. 將樣品作適當稀釋（多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。 

5. 各孔加入200微升稀釋后的1×G250染色液，室溫放置3-5分鐘。

 6. 用酶標儀測定A595，或560-610nm之間的其它波長的吸光度。 

7. 根據標準曲線計算出樣品中的蛋白濃度。 

二．分光光度計法 

如無酶標儀，染色反應可在離心管中進行，反應液混勻后加入比色皿中，使用分光光度計測定吸光值。步驟如下：    

1. 取八支（或者更多）干凈的10ml離心管，標記上號。

 2. 取100ulBSA加入PBS 2.4ml稀釋終濃度為0.2mg/ml。 

3. 5×G250染色液使用前請顛倒3-5次混勻，取10ml 5×G250染色液，加入40ml雙蒸水，混勻成1×G250染色液，此1×G250染色液可在4℃保存一周。

4. 按下表加入試劑(以每孔5ml計，多余的用來清洗比色皿)

5. 反應3分鐘后測OD值。為了實驗的準確性，可每間隔2分鐘加一管染色液，每間隔2分鐘測一管OD值。如下表：

此圖為伯樂酶標儀680，單波長，570nm測得。室溫反應三分鐘